薄层色谱仪操作方法

发布日期：2015-04-01 浏览次数：69

　　(1)薄层板制备除另有规定外,将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合,去除表面的气泡后，倒入涂布器中,在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为0.2～0.3mm)，取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度(可通过透射光和反射光检视)。
　　
　　(2)点样除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径及点间距离同纸色谱法,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。
　　
　　(3)展开展开缸如需预先用展开剂饱和，可在缸中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封缸顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。
　　
　　将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中,浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5～1.0cm(切勿将样点浸入展开剂中),密封缸盖,待展开至规定距离(一般为10～15cm),取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。
　　
　　(4)如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。
　　
　　薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。
　　
　　斑点洗脱后测定法
　　
　　薄层经展开后用刮刀或捕集器将斑点的吸附剂捕集后，再用适当有机溶剂洗脱，然后用可见、紫外分光光度法、荧光分光光度法测定含量。
　　
　　但样品斑点不能喷显色剂，以免影响不测定，斑点位置的确定方法。
　　
　　样品在紫外线下发射荧光的，可在紫外灯下观察斑点并用针划去斑点位置。
　　
　　用碘蒸汽显色，在组分处理出棕色斑点(碘吸附后会挥发)。
　　
　　用标准物对照，将标准点于边上一测显色时，盖住样品，定出斑点位置。